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公司新聞

哪些原因會(huì )導致ELISA試劑盒的檢測不成功?

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       ELISA試劑盒即酶聯(lián)免疫吸附試驗,是一種常用的固相酶免疫測定方法。由于ELISA方法靈敏,特異性強不需要特殊設備,所以被廣泛應用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在臨床檢驗中除正常反應外,有時(shí)??梢?jiàn)到一些錯誤結果(即假陽(yáng)性或假陰性);本司在這里為大家解讀下ELISA試劑盒檢測的影響因素中標本的影響。
  溶血標本及混有紅細胞的血清采用ELISA法檢測易產(chǎn)生假陽(yáng)性??赡苁侨苎逯泻羞^(guò)氧化酶物質(zhì)(紅細胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素),在洗滌過(guò)程中往往難以*洗脫,它可使H2O2釋放出原生態(tài)氧(O),從而催化底物四甲基聯(lián)苯胺生成可溶性的有色物質(zhì),即顯藍色,產(chǎn)生假陽(yáng)性[2]。所以嚴重溶血標本禁用。
  標本受細菌污染。因菌體中可能含有內源性辣根過(guò)氧化物酶,因此,被細菌污染的標本同溶血標本一樣,亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結果。
  標本保存不當。在冰箱中保存過(guò)久的標本,在間接法ELISA測定中會(huì )導致本底過(guò)深、造成假陽(yáng)性;為克服上述干擾,ELISA試劑盒測定的血清標本宜為新鮮采集;如不能立即測定,5 d內測定的血清標本可存放于4℃,1周后測定的血清標本應低溫凍存;凍存后融解的標本,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應充分混合后再測定,但混勻時(shí)應輕柔,不可強烈振蕩。
  塑料試管能吸附抗原物質(zhì),樣本久置在塑料管內會(huì )使樣本內抗原含量下降造成假陰性。建議使用真空采血管;并使用非抗凝標本,肝素抗凝血漿會(huì )增加OD值,EDTA、酶抑制劑(如NaN3)可抑制ELISA系統中辣根過(guò)氧化物酶活性。
  標本凝固不全。在工作中,有時(shí)為了爭取時(shí)間快速檢測,常在血液還未開(kāi)始凝固時(shí)即強行離心分離血清,使血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測定過(guò)程中可以形成肉眼可見(jiàn)的纖維蛋白塊,易造成假陽(yáng)性結果;因此血液標本采集后必須使其充分凝固后再分離血清。
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